Цей посібник має за мету допомогти студентам, слухачам і лікарям різних профілів зрозуміти можливості лабораторного імунологічного обстеження при багатьох хворобах. У ньому акцентовано увагу на різних ланках імунної системи (фактори природної резистентності, специфічні механізми захисту), схематично роз’яснено зв’язок між цими ланками. Це четверте видання посібника українською мовою, доповнене й оновлене, охоплює широке коло питань, дозволяє зрозуміти масштабність застосування імунологічних методів обстеження. Різні гілки цих обстежень будуть розширюватись і вдосконалюватись. Посібник виданий за власною ініціативою авторів, тому сподіваємося на зауваження й рекомендації, які з вдячністю приймемо. 

ЗМІСТ

ПЕРЕДМОВА ............................................................................................3

1. ВИЗНАЧЕННЯ ІМУНОЛОГІЇ. ІСТОРІЯ РОЗВИТКУ .............4

2. СТРУКТУРА Й ФУНКЦІЇ ІМУННОЇ СИСТЕМИ. ОРГАНИ

ІМУННОЇ СИСТЕМИ ............................................................................7

2.1. ЦЕНТРАЛЬНІ ОРГАНИ ІМУНІТЕТУ ...........................................7

2.1.1. Тимус ...........................................................................................7

2.1.2. Кістковий мозок........................................................................8

2.2. ПЕРИФЕРИЧНІ ОРГАНИ ІМУННОЇ СИСТЕМИ .....................8

2.2.1. Селезінка.....................................................................................8

2.2.2. Лімфатичні вузли...................................................................11

2.2.3. Лімфоїдна тканина, асоційована зі слизовою

оболонкою (MALT) ..........................................................................12

3. МЕХАНІЗМИ ПРИРОДНОЇ РЕЗИСТЕНТНОСТІ ...................12

3.1. КЛІТИННИЙ ВРОДЖЕНИЙ ІМУНІТЕТ...................................13

3.2. ГУМОРАЛЬНИЙ ВРОДЖЕНИЙ ІМУНІТЕТ ............................22

Патогенетична роль комплементу ....................................................25

3.3. ЛАБОРАТОРНЕ ДОСЛІДЖЕННЯ ДЕЯКИХ

КЛІТИННИХ І ГУМОРАЛЬНИХ ФАКТОРІВ ПРИРОДНОЇ

РЕЗИСТЕНТНОСТІ ................................................................................34

3.3.1. Оцiнка фагоцитарної активностi нейтрофiлiв

/ФАН/ ...............................................................................................34

3.3.2. Оцінка фагоцитарної активності лейкоцитів

периферичної крові людини з використанням

мікроорганізмів, мічених флюорохромами ..............................36

3.3.3. Визначення загальної окисно-вiдновної активностi

нейтрофiлiв у тестi вiдновлення нiтросинього тетразолiю

(НСТ‑тест) (метод Park B. H., Firkig S. M., Smitwick E. M.,

1968) у модифікації (Бажора Ю. И., Тимошевский В. Н.,

Протченко П. З., Головченко А. Н., 1981)...................................40

3.3.4. Цитофлюориметрична оцінка продукування

активних форм кисню фагоцитами периферичної крові.....42

3.3.5. Виявлення катiонних лiзосомальних білків

(метод із бромфеноловим синiм за М. Г. Шубічем).................45

311

3.3.6. Визначення активності мієлопероксидази ......................46

3.3.7. Визначення функціональної активності моноцитів .....47

3.3.8. Визначення концентрації лізоциму

(Пастер Е. У., Овод В. В., Позур В. К., Вихоть Н. Е., 1989) .......48

3.3.8.1. Визначення кількості лізоциму в біологічних

субстратах методом дифузії в агарі ........................................48

3.3.8.2. Визначення кількості лізоциму в біологічних

субстратах спектрофотометричним методом .....................49

3.3.9. Визначення загальної комплементарної активностi

сироватки кровi.................................................................................50

Стандартна шкала гемолізу .............................................................51

Шкала гемолізу ...................................................................................51

Коефіцієнт поправки за Мальтанером Ф. ......................................53

3.3.10. Визначення рiзних компонентiв комплементу ............53

4. АНТИГЕНИ .........................................................................................53

5. АНТИТІЛА ..........................................................................................56

5.1. ВИЗНАЧЕННЯ КОНЦЕНТРАЦIЇ СИРОВАТКОВИХ

IМУНОГЛОБУЛIНIВ ОСНОВНИХ КЛАСIВ МЕТОДОМ

РАДIАЛЬНОЇ IМУНОДИФУЗIЇ В ГЕЛI ЗА МАНЧIНI (1965).......58

6. ЦИТОКІНОВА СІТКА ....................................................................59

6.1. ІНТЕРЛЕЙКІНИ...............................................................................65

6.1.1. Визначення людського інтерлейкіну –1β (IL-1β)

у сироватці крові за допомогою набору реактивів

«Cytelisa» (USA).................................................................................77

6.2. ІНТЕРФЕРОНИ ................................................................................80

6.3. ФАКТОРИ НЕКРОЗУ ПУХЛИН .................................................82

6.4. РОСТОВІ ФАКТОРИ.......................................................................83

6.5. ХЕМОКІНИ........................................................................................84

7. МОЛЕКУЛИ АДГЕЗІЇ ......................................................................84

8. ГОЛОВНИЙ КОМПЛЕКС ГІСТОСУМІСНОСТІ (ГКГС) ......91

9. ТРАНСПЛАНТАЦІЯ ОРГАНІВ ....................................................96

9.1. ІМУНОЛОГІЧНИЙ МОНІТОРИНГ РЕЦИПІЄНТА

ПІСЛЯ ТРАНСПЛАНТАЦІЇ ...............................................................100

312

9.2. ВИЯВЛЕННЯ НLA-ФЕНОТИПУ ДОНОРА Й

РЕЦИПІЄНТА МЕТОДОМ ТИПУВАННЯ ЛІМФОЦИТІВ

ПЕРИФЕРИЧНОЇ КРОВІ ....................................................................101

9.2.1. Приготування суміші фікол-верографіну.....................101

9.2.2. Приготування маточного 5 % р-ну еозину....................101

9.2.3. Приготування робочого розчину еозину.......................101

9.2.4. Виділення лімфоцитів.........................................................101

9.2.5. Постановка реакції типування лімфоцитів...................102

9.3. ВИЯВЛЕННЯ ПОПЕРЕДНЬО ІСНУЮЧИХ АНТИТІЛ

У ПЕРЕХРЕСНІЙ ПРОБІ (CROSS-MATCH) ...................................103

9.4. МЕТОДИ ГЕНОТИПУВАННЯ HLA .........................................103

9.4.1. Виділення ДНК ....................................................................105

9.4.2. Вимірювання концентрації й чистоти ДНК .................105

9.4.4. HLA- генотипування методом ПЛР-ССП (PCR-SSP) ..106

9.4.5. HLA-генотипування методом ПЛР-ССОП ...................107

9.4.6. HLA-генотипування з використанням технології

«Luminex» ........................................................................................109

9.4.7. HLA-генотипування з використанням секвенування 110

9.4.8. Контроль якості HLA-типування ....................................112

10. ГРУПИ КРОВІ ................................................................................116

Склад груп крові системи АВ0

(Гжегоцький М.Р., Заячківська О.С.) ...............................................117

10.1. ВИЗНАЧЕННЯ ГРУПИ КРОВІ СИСТЕМИ АВ0

ЗА ДОПОМОГОЮ СТАНДАРТНИХ ЕРИТРОЦИТІВ ................119

10.2. ВИЗНАЧЕННЯ ГРУПИ КРОВІ СИСТЕМИ АВ0 ЗА

ДОПОМОГОЮ СТАНДАРТНИХ СИРОВАТОК .........................120

10.3. ВИЗНАЧЕННЯ ГРУПИ КРОВІ СИСТЕМИ АВ0 ЗА

ДОПОМОГОЮ ЦОЛІКЛОНІВ АНТИ-А І АНТИ-В ....................122

10.4. ВИЗНАЧЕННЯ АГЛЮТИНІНІВ .............................................123

10.5. ПРИЧИНИ ПОМИЛОК У ВИЗНАЧЕННІ ГРУП КРОВІ

ЗА СИСТЕМОЮ АВ0 ТА ЇХ УНИКНЕННЯ

(НОВАК В. Л. та ін., 1999) ...................................................................124

10.5.1. Розбіжність результатів визначення груп крові

системи АВ0 за антигенами еритроцитів і за

ізоаглютинінами сироватки тестованої особи .......................124

10.5.2. Технічні помилки у визначенні груп крові ................124

10.5.3. Помилки у визначенні груп крові, пов’язані з

аномальними властивостями тестованих еритроцитів .......125

313

10.5.4. Помилки, пов’язані з аномальними властивостями

тестованої сироватки ....................................................................126

11. СИСТЕМА КРОВІ РЕЗУС ...........................................................127

11.1. ВИЗНАЧЕННЯ РЕЗУС-НАЛЕЖНОСТІ

ЗА ДОПОМОГОЮ СТАНДАРТНИХ СИРОВАТОК ...................128

11.2. ВИЗНАЧЕННЯ АНТИГЕНІВ СИСТЕМИ РЕЗУС ЗА

ДОПОМОГОЮ МОНОКЛОНАЛЬНИХ АНТИТІЛ .....................129

11.2.1. Характеристика моноклональних тест-реагентів,

призначених для виявлення антигенів системи резус

у людей .............................................................................................129

11.2.2. Визначення D-антигену системи резус

за допомогою тест-реагенту супер анти-D ..............................130

11.2.3. Непрямий тест Кумбса для визначення

D11 антигену....................................................................................130

11.3. ДОСЛІДЖЕННЯ СИРОВАТКИ НА НАЯВНІСТЬ

НЕПОВНИХ РЕЗУС-АНТИТІЛ МЕТОДОМ

КОНГЛЮТИНАЦІЇ ЗА ДОПОМОГОЮ ЖЕЛАТИНУ................131

11.4. ВИЗНАЧЕННЯ ТИТРУ НЕПОВНИХ РЕЗУС-АНТИТІЛ

МЕТОДОМ КОНГЛЮТИНАЦІЇ ЗА ДОПОМОГОЮ

ЖЕЛАТИНУ ..........................................................................................132

11.5. ПОМИЛКИ У ВИЗНАЧЕННІ Rh-ФАКТОРА ......................133

11.5.1. Помилки організаційно-технічного характеру .........133

11.5.2. Помилки, пов’язані з використанням неякісних

сироваток .........................................................................................133

11.5.3. Помилки, зумовлені біологічними особливостями

дослідної крові ...............................................................................133

12. АДАПТИВНИЙ ІМУНІТЕТ .......................................................134

12.1. ДОЗРІВАННЯ Т- і В-ЛІМФОЦИТІВ .......................................134

12.1.1. Субпопуляції Т-лімфоцитів ............................................135

12.1.2. Походження й формування В-лімфоцитів .................137

12.2. IМУНОЛОГIЧНI Й ЦИТОХIМIЧНI МЕТОДИ ДЛЯ

ТИПУВАННЯ ЛIМФОЇДНИХ І КРОВОТВОРНИХ КЛIТИН ....138

12.2.1. Визначення популяцій і субпопуляцій

Т- і В-лiмфоцитiв ............................................................................138

12.3. ОЦIНКА ПРОЛIФЕРАТИВНОЇ АКТИВНОСТI Т- і

В-ЛІМФОЦИТІВ У РЕАКЦIЇ БЛАСТТРАНСФОРМАЦIЇ НА

МIТОГЕНИ, АНТИГЕНИ, АЛОГЕННI КЛIТИНИ........................150

314

12.4. МЕТОД ОЦІНКИ ПРОЛІФЕРАТИВНОЇ

АКТИВНОСТІ ЛІМФОЦИТІВ ЗА ДОПОМОГОЮ 5- і

6-КАРБОКСИФЛУОРЕСЦЕЇНДІАЦЕТАТ-СУКЦИНІЛМІДИЛ

ЕФІРУ (ПИНЕГИН Б. В. и др., 2001).................................................153

12.5. ДОСЛІДЖЕННЯ В-ЛАНКИ ІМУНІТЕТУ ..............................154

13. СХЕМА ІМУННОЇ ВІДПОВІДІ .................................................155

13.1. ДИФЕРЕНЦІЮВАННЯ Т-ЛІМФОЦИТІВ-ХЕЛПЕРІВ

І і ІІ ТИПІВ...............................................................................................156

13.2. Т-НЕЗАЛЕЖНЕ ПРОДУКУВАННЯ АНТИТІЛ....................157

13.3. Т-ЗАЛЕЖНЕ ПРОДУКУВАННЯ АНТИТІЛ..........................157

14. ДИНАМІКА ГЕМО- ТА ІМУНОГРАМ

ПРИ ЗАПАЛЬНИХ ПРОЦЕСАХ .....................................................158

14.1. ІМУННА ВІДПОВІДЬ ПРИ ВІРУСНИХ

І БАКТЕРІЙНИХ ІНФЕКЦІЯХ...........................................................160

15. КЛАСИФІКАЦІЯ ГЕМОГРАМ ПРИ ЗАПАЛЬНОМУ

ПРОЦЕСІ ...............................................................................................162

16. ІМУНОПАТОЛОГІЧНІ СИНДРОМИ ....................................163

17. ГІПЕРЧУТЛИВІСТЬ .....................................................................164

17.1. ТИПИ ГІПЕРЧУТЛИВОСТІ

(класифікація Джелла й Кумбса з доповненнями) .....................165

17.2. ХАРАКТЕРИСТИКА РЕАКЦІЙ ГІПЕРЧУТЛИВОСТІ

І ТИПУ .....................................................................................................166

17.3. ХАРАКТЕРИСТИКА РЕАКЦІЙ ГІПЕРЧУТЛИВОСТІ

ІІ ТИПУ....................................................................................................168

17.4. ХАРАКТЕРИСТИКА РЕАКЦІЙ ГІПЕРЧУТЛИВОСТІ

ІІІ ТИПУ...................................................................................................168

17.5. ХАРАКТЕРИСТИКА РЕАКЦІЙ ГІПЕРЧУТЛИВОСТІ

ІV ТИПУ ..................................................................................................172

17.6. ХАРАКТЕРИСТИКА РЕАКЦІЙ ГІПЕРЧУТЛИВОСТІ

V ТИПУ....................................................................................................173

КРІОПАТІЇ..............................................................................................174

17.7. КЛIНIКО-ЛАБОРАТОРНА ДIАГНОСТИКА

АЛЕРГIЧНИХ ХВОРОБ .......................................................................181

17.7.1. Непряма дегрануляцiя базофiлiв (тест Шеллi)...........182

315

17.7.2. Реакцiя дегрануляцiї гладких клiтин............................182

17.7.3. Реакцiя гальмування мiграцiї лейкоцитiв (РГМЛ).....183

17.7.4. Визначення концентрацiї сироваткового IgЕ..............183

17.7.5. Визначення рiвня циркулюючих iмунних

комплексiв (ЦIК) у сироватцi кровi............................................184

17.7.6. Показник ушкодження нейтрофiлiв (ПУН)................185

17.7.7. Тест активації базофілів із використанням

методу проточної цитометрії......................................................186

17.7.8. Молекулярна діагностика алергії ..................................188

18. IМУНОДЕФIЦИТИ ......................................................................189

18.1. ПЕРВИННІ ІМУНОДЕФІЦИТИ...............................................190

18.2. ВТОРИННІ ІМУНОДЕФІЦИТИ...............................................197

18.2.1. Класифікація вторинних імунодефіцитів

(витяг із примірного положення про відділення

клінічної імунології, імунотерапії, наказ МОЗ України

від 19.11.02, № 422)..........................................................................199

18.2.2. Причини розвитку вторинних імунодефіцитів.........201

18.2.2.1. Протокол для діагностики ВІД................................202

18.2.2.2. Характеристика форм ВІД........................................202

18.2.2.3. Характеристика ступенів компенсації ВІД

(за ступенем тяжкості)...............................................................202

18.2.2.4. Характеристика клінічних синдромів ВІД ...........202

18.2.2.5. Характеристика видів дефектів

у імунній системі........................................................................203

18.2.2.6. Характеристика варіантів перебігу ВІД ...............203

18.2.2.7. Характеристика ступенів імунної

недостатності...............................................................................204

18.2.2.8. Функціональна недостатність хворого..................204

18.2.2.9. Протокол для діагностики ВІД................................204

19. IМУННА ТОЛЕРАНТНIСТЬ .....................................................207

19.1. МЕХАНIЗМИ ЗАХИСТУ ВIД АУТОРЕАКТИВНОСТI .......208

19.2. IНДУКЦIЯ ТОЛЕРАНТНОСТI .................................................209

20. ІМУНОЛОГІЯ ВАГІТНОСТІ .....................................................212

20.1. ФАКТОРИ ІМУНОСУПРЕСІЇ ПРИ НОРМАЛЬНІЙ

ВАГІТНОСТІ...........................................................................................214

316

21. ІМУНОАНДРОЛОГІЯ .................................................................215

21.1. МЕТОДИ ВИЯВЛЕННЯ АНТИСПЕРМАЛЬНИХ

АНТИТІЛ.................................................................................................216

21.1.1. Тест аглютинації сперматозоїдів (Йегер Л.,1990) .......216

21.1.2. Тест іммобілізації сперматозоїдів

за Isojima і Lehmann (Йегер Л., 1990)..........................................217

21.1.3. Методи непрямої імунофлуоресценції

за Coons і Kaplan (Йегер Л., 1990) ...............................................217

21.1.4. Якісні тести імунодіагностики безпліддя.....................218

21.1.5. Частота виявлення антиспермальних антитіл ...........218

21.1.6. Антиспермальні антитіла в жінок..................................219

22. ІМУНОДІАГНОСТИКА ПУХЛИН ..........................................219

22.1. ДІАГНОСТИКА ПУХЛИН КРОВОТВОРНОЇ

Й ЛІМФОЇДНОЇ ТКАНИН.................................................................228

23. ОСНОВНІ ПРИНЦИПИ ОЦІНКИ ІМУНОГРАМИ ...........237

24. ОЦІНКА ІМУННОГО СТАТУСУ ЛЮДИНИ ......................240

25. СУЧАСНІ МЕТОДИ ІМУНОЛОГІЧНИХ

ДОСЛІДЖЕНЬ .....................................................................................242

25.1. ЗАСТОСУВАННЯ ПРОТОЧНОЇ ЦИТОМЕТРІЇ ДЛЯ

ОЦІНКИ ФУНКЦІОНАЛЬНОЇ АКТИВНОСТІ ІМУННОЇ

СИСТЕМИ ЛЮДИНИ.........................................................................242

25.1.1. Кількісне визначення субпопуляцій лімфоцитів

за допомогою проточної лазерної цитометрії з

використанням моноклональних антитіл із подвійною

міткою ...............................................................................................244

25.2. МЕТОД ПОЛІМЕРАЗНОЇ ЛАНЦЮГОВОЇ

РЕАКЦІЇ (ПЛР) ......................................................................................248

25.3. ІМУНОФЕРМЕНТНИЙ АНАЛІЗ.............................................250

25.3.1. Зовнішній і внутрішній контроль якості в

імуноферментному аналізі..........................................................255

25.4. ІМУНОХЕМІЛЮМІНЕСЦЕНТНИЙ АНАЛІЗ (ІХЛА) ........271

Додаток 1

Основні поняття про Міжнародну систему одиниць

фізичних величин (СІ) ........................................................................274

317

Додаток 2

Внутрішньолабораторний контроль якості...................................275

Додаток 2а...............................................................................................276

Додаток 3

Розчини й реактиви..............................................................................277

Додаток 4

Значення показників імунограми в практично здорових

людей (17–35 років) ..............................................................................280

Додаток 5

Перелік необхідного обладнання для імунологічних

досліджень для діагностики неінфекційних хвороб

і реакції неспецифічного імунітету .................................................281

Додаток 6

Нормативи витрати часу на імунологічні дослідження

(витяг із примірного положення про імунологічну

лабораторію, наказ МОЗ України № 422 від 19.11.2002 р.) ........283

СХЕМИ ...................................................................................................285

ЛІТЕРАТУРА ........................................................................................303